對植物的培養方法方法(植物細胞培養的方法)

1.植物細胞培養的方法有哪些

植物組織培養一般分為以下幾種：

1、胚胎培養

指以從胚珠中分離出來(lái)的成熟或未成熟胚為外植體的離體無(wú)菌培養。

2、器官培養

指以植物的根、莖、葉、花、果等器官為外植體的離體無(wú)菌培養，如根的根尖和切段，莖的莖尖、莖節和切段，葉的葉原基、葉片、葉柄、葉鞘和子葉，花器的花瓣、雄蕊（花藥、花絲）、胚珠、子房、果實(shí)等的離體無(wú)菌培養。

3、組織培養

指以分離出植物各部位的組織（如分生組織、形成層、木質(zhì)部、韌皮部、表皮、皮層、胚乳組織、薄壁組織、髓部等），或已誘導的愈傷組織為外植體的離體無(wú)菌培養。這是狹義的植物組織培養。

4、細胞培養

指以單個(gè)游離細胞（如用果酸酶從組織中分離的體細胞，或花粉細胞，卵細胞）為接種體的離體無(wú)菌培養。

5、原生質(zhì)體培養。

指以除去細胞壁的原生質(zhì)體為外植體的離體無(wú)菌培養

組織培養的特點(diǎn)

1、培養條件可以人為控制

組織培養采用的植物材料完全是在人為提供的培養基和小氣候環(huán)境條件下進(jìn)行生長(cháng)，擺脫了大自然中四季、晝夜的變化以及災害性氣候的不利影響，且條件均一，對植物生長(cháng)極為有利，便于穩定地進(jìn)行周年培養生產(chǎn)。

2、生長(cháng)周期短，繁殖率高

植物組織培養是由于人為控制培養條件，根據不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培養條件，因此生長(cháng)較快。另外，植株也比較小，往往20-30d為一個(gè)周期。所以，雖然植物組織培養需要一定設備及能源消耗，但由于植物材料能按幾何級數繁殖生產(chǎn)，故總體來(lái)說(shuō)成本低廉，且能及時(shí)提供規格一致的優(yōu)質(zhì)種苗或脫病毒種苗。

3、管理方便，利于工廠(chǎng)化生產(chǎn)和自動(dòng)化控制

植物組織培養是在一定的場(chǎng)所和環(huán)境下，人為提供一定的溫度、光照、濕度、營(yíng)養、激素等條件，極利于高度集約化和高密度工廠(chǎng)化生產(chǎn)，也利于自動(dòng)化控制生產(chǎn)。它是未來(lái)農業(yè)工廠(chǎng)化育苗的發(fā)展方向。它與盆栽、田間栽培等相比省去了中耕除草、澆水施肥、防治病蟲(chóng)等一系列繁雜勞動(dòng)，可以大大節省人力、物力及田間種植所需要的土地

2.常用的植物培養方法有哪些

常用的植物培養方法除傳統的土壤培養法（土培法）外，還有一些人工培養法（無(wú)土栽培技 術(shù)）逐步在農業(yè)科學(xué)研究和生產(chǎn)實(shí)踐中應用，如溶液培養法（水培法）、砂基培養法（砂培法）、氣培法（氣栽法）和營(yíng)養膜法（營(yíng)養液膜技術(shù)）等。

① 水培法又稱(chēng)溶液培養法，是在含有全部或部分營(yíng)養元素的溶液中栽培植物的方法。 ② 砂培法或砂基培養法是以洗凈的石英砂、珍珠巖、蛭石或玻璃球等（中性物質(zhì)）作為支 持物，加入含有全部或部分營(yíng)養元素的溶液來(lái)栽培植物的方法。

③ 氣培法或氣栽法。將根系置于營(yíng)養液氣霧中栽培植物的方法。

④ 營(yíng)養膜法或營(yíng)養液膜技術(shù)。將植物培養在一個(gè)稍微傾斜的長(cháng)槽中，讓溶液向下流，形成 一層通氣良好的營(yíng)養液的薄膜。

人工培養法研究植物營(yíng)養的最大優(yōu)點(diǎn)是，能人為地控制營(yíng)養液的成分，通過(guò)加入或除去某些元 素，觀(guān)察植物的生長(cháng)發(fā)育情況及缺素癥狀，可以判定某元素是否屬于必需元素以及它的生理作用。 人工培養法自誕生之日到現在已有140多年的歷史了，它不單單可以用于判斷植物的必需元 素和缺素癥狀，而且已成為一種切實(shí)可行的農業(yè)生產(chǎn)手段。

20世紀70年代以來(lái)發(fā)展的間歇水培 法、氣培法以及營(yíng)養液膜技術(shù)已用于蔬菜和花丼，以及某些農作物（如馬鈴薯微型薯的快繁）的 生產(chǎn)栽培。目前，美國已把無(wú)土栽培列為當代十大技術(shù)發(fā)展之一。

3.傳統植物培養方法

1、有性繁殖

有性繁殖也稱(chēng)種子繁殖，是用花卉種子進(jìn)行繁殖的過(guò)程。近年來(lái)也有將種子中的胚取出，進(jìn)行培養以形成新株，稱(chēng)為"胚培養"方法。大部分一、二年生草花和部分多年生草花常采用種子繁殖，這些種子大部分為f1代種子，具有優(yōu)良的性狀，但需要每年制種。如翠菊、雞冠花、一串紅、金魚(yú)草、金盞菊、百日草、三色堇、矮牽牛等。

2、無(wú)性繁殖

無(wú)性繁殖也稱(chēng)營(yíng)養繁殖，是用花卉營(yíng)養體的一部分（根、莖、葉、芽）為材料，利用植物細胞的全能性而獲得新植物的繁殖方法。通常包括分生、扦插、嫁接、壓條等方法。溫室木本花卉、多年生花卉、多年生一、二年生栽培的花卉常用分生、扦插方法繁殖。如一品紅、變葉木、金盞菊、矮牽牛、瓜葉菊等。仙人掌多漿植物也常采用扦插、嫁接繁殖。

4.植物培養技術(shù)有哪些

1、植物組織培養實(shí)驗室的設計原則： ①實(shí)驗室最好設緩沖間或走道，以方便出入，減少污染； ②培養室最好建在南面，并設大窗戶(hù)以利自然采光，減少能耗； ③培養室及接種室均不宜過(guò)大，并裝滑動(dòng)門(mén)，接種室還需設一緩沖間，以減少污染。

2、決定組培實(shí)驗室規模的因素： ①所要進(jìn)行的實(shí)驗的性質(zhì)； ②所能得到的經(jīng)費的多少。 3、組培實(shí)驗室的布局： 基本要求：便于隔離、便于操作、便于滅菌、便于觀(guān)察。

布局：一般按自然工作程序先后，安排成一條連續的生產(chǎn)線(xiàn)，應避免交叉或倒排。 二、植物組織培養實(shí)驗室的組成及其功能： 1.基本實(shí)驗室： ①準備室：可分為洗滌室、試劑室、培養基室、滅菌室等 功能：進(jìn)行一切與實(shí)驗有關(guān)的準備工作，包括器皿洗滌、試劑的配制及培養基的制備、滅菌和貯存等。

要求：寬敞明亮，通風(fēng)條件好。 設備：洗滌池、工作臺、試劑柜、冰箱、天平、微波爐、烘箱、高蒸汽滅菌鍋等。

②接種室：也可置于準備室內僻靜的一角 功能：進(jìn)行無(wú)菌操作。 要求：房間一般不宜過(guò)大，需設一緩沖間，要求封閉性好，干燥清潔，能較長(cháng)時(shí)間保持無(wú)菌。

設備：超凈工作臺、空調等。 ③培養室： 功能：對離體材料進(jìn)行控制培養。

要求：能控制光照和溫度（25℃±2℃），防止微生物感染，保持干燥和清潔。 設備：培養架、搖床、空調等。

2.輔助實(shí)驗室： ①馴化移栽室： 功能：提供組培苗煉苗的環(huán)境。 要求：能控溫調濕、控光通風(fēng)。

②育苗溫室或大棚： 功能：生產(chǎn)商品苗。 要求：能控制光照和濕度，并具一定的保溫性能。

③細胞學(xué)實(shí)驗室：觀(guān)察室 功能：對培養材料進(jìn)行細胞學(xué)鑒定和研究。 要求：清潔、明亮、干燥，使各種光學(xué)儀器不受潮濕和灰塵污染。

④攝影室及暗室：在有條件的情況下建立。 功能：進(jìn)行培養材料的攝影記錄和膠片沖印。

⑤生化分析室：在以培養細胞產(chǎn)物為主要目的的實(shí)驗室中，應建立相應的分析化驗實(shí)驗室，以便于對培養物的有效成分隨時(shí)進(jìn)行取樣檢查。 三、常用儀器設備： 1、基本設備：冰箱、天平、酸度計、電蒸餾水器、純水器、電爐、培養基分裝器、攪拌器、恒溫水浴鍋等。

2、滅菌設備：蒸汽壓力滅菌鍋、干熱消毒柜、過(guò)濾滅菌裝置、噴霧消毒器、紫外燈。 3、無(wú)菌操作設備：凈化工作臺、接種箱。

4、光溫控制設備：時(shí)間程序控制器、空調及溫度感應器等。 5、細胞培養設備：培養設備根據需要而定，包括培養架、培養箱、搖床、生物反應器等。

6、細胞學(xué)鑒定設備：光學(xué)研究顯微鏡、實(shí)體顯微鏡、倒置顯微鏡。 7、其它設備：如果有條件和需要可配制攝影設備、生化分析設備等。

四、常用工具： 1、培養容器： （1）玻璃容器：如培養皿、三角瓶、試管、廣口瓶、罐頭瓶等，要求無(wú)色、透光，不產(chǎn)生折射。 （2）塑料容器：材質(zhì)輕、不易破碎、制作方便 ①一次性使用容器：如聚乙烯、聚丙烯材料，要求透光、無(wú)毒； ②可重復使用容器：如聚丙烯、聚碳酸酯材料，要求耐高溫高壓。

2、一般容器：燒杯、廣口瓶、試劑瓶等 3、計量器皿：量筒、容量瓶、移液管等 4、金屬用具：鑷子、剪刀、解剖刀、接種針、接種鏟等 5、其他用具：滴瓶、玻璃棒、漏斗、注射器、周轉筐、試管架、酒精燈等。

5.植物組織培養的步驟有哪些

組織培養的方法和步驟要根據培養目的適當選取材料，選擇原則：易于誘導、帶菌少。

要選取植物組織內部無(wú)菌的材料。這一方面要從健壯的植株上取材料，不要取有傷口的或有病蟲(chóng)的材料。

另一方面要在晴天，最好是中午或下午取材料，決不要在雨天、陰天或露水未干時(shí)取材料。因為健壯的植株和晴天光合呼吸旺盛的組織，有自身消毒作用，這種組織一般是無(wú)菌的。

培養材料的消毒 從外界或室內選取的植物材料，都不同程度地帶有各種微生物。這些污染源一旦帶人培養基，便會(huì )造成培養基污染。

因此，植物材料必須經(jīng)嚴格的表面滅菌處理，再經(jīng)無(wú)菌操作手續接到培養基上。第一步，將采來(lái)的植物材料除去不用的部分，將需要的部分仔細洗干凈，如用適當的刷子等刷洗。

把材料切割成適當大小，即滅菌容器能放人為宜。置自來(lái)水龍頭下流水沖洗幾分鐘至數小時(shí)，沖洗時(shí)間視材料清潔程度而宜。

易漂浮或細小的材料，可裝入紗布袋內沖洗。流水沖洗在污染嚴重時(shí)特別有用。

洗時(shí)可加入洗衣粉清洗，然后再用自來(lái)水沖凈洗衣粉水。洗衣粉可除去輕度附著(zhù)在植物表面的污物，除去脂質(zhì)性的物質(zhì)，便于滅菌液的直接接觸。

當然，最理想的清洗物質(zhì)是表面活性物質(zhì)—吐溫。第二步是對材料的表面浸潤滅菌。

要在超凈臺或接種箱內完成，準備好消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、無(wú)菌水、手表等。用70%酒精浸10~30s。

由于酒精具有使植物材料表面被浸濕的作用，加之70%酒精穿透力強，也很易殺傷植物細胞，所以浸潤時(shí)間不能過(guò)長(cháng)。有一些特殊的材料，如果實(shí)、花蕾、包有苞片、苞葉等的孕穗，多層鱗片的休眠芽等等，以及主要取用內部的材料，則可只用70%酒精處理稍長(cháng)的時(shí)間。

處理完的材料在無(wú)菌條件下，待酒精蒸發(fā)后再剝除外層，取用內部材料。第三步是用滅菌劑處理。

表面滅菌劑的種類(lèi)較多，可根據情況選取1—2種使用見(jiàn)表。第四步是用無(wú)菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，視采用的消毒液種類(lèi)，涮洗3-l0次左右。

無(wú)菌水涮洗作用是免除消毒劑殺傷植物細胞的副作用注意：①酒精滲透性強，幼嫩材料易在酒精中失綠，所以浸泡時(shí)間要短，防止酒精殺死植物細胞。②老熟材料，特別是種子等可以在酒精中浸泡時(shí)間長(cháng)一些，如種子可以浸泡5分鐘。

③升汞的滲透力弱，一般浸泡10分鐘左右，對植物材料的殺傷力不大。④漂白粉容易導致植物材料失綠，所以對于幼嫩材料要慎用。

⑤在消毒液中加入濃度為0.08—0.12%的吐溫20或80（一種濕潤劑），可以降低植物材料表面的張力，達到更好的消毒效果。滅菌劑 使用濃度（%） 持續時(shí)間（min） 去除的難易 效果次氯酸鈣 9~10 5~30 易 很好次氯酸鈉 2 5~30 易 很好氯化汞 0.1~1 5~8 較難 最好抗菌素 4~50mg/L 30~60 中 較好制備外植體 將已消毒的材料，用無(wú)菌刀、剪、鑷等，在無(wú)菌的環(huán)境下，剝去芽的鱗片、嫩枝的外皮和種皮胚乳等，葉片則不需剝皮。

在操作中嚴禁用手觸動(dòng)材料。接種和培養 （一）接種在無(wú)菌壞境下，將切好的外植體立即接在培養基上，每瓶接種1-2個(gè)，以防止交叉污染。

（二）封口接種后，瓶、管用無(wú)菌藥棉或蓋封口，培養皿用無(wú)菌膠帶封口。 （三）溫度培養基大多應保持在25℃左右，但要因花卉種類(lèi)及材料部位的不同而區別對待。

增殖外植體的增殖是組培的關(guān)鍵階段，在新梢等形成后為了擴大繁殖系數，需要繼代培養。把材料分株或切段轉入增殖培養基中，增殖培養基一般在分化培養基上加以改良，以利于增殖率的提高。

增殖1個(gè)月左右后，可視情況進(jìn)行再增殖。根的誘導繼代培養形成的不定芽和側芽等一般沒(méi)有根，必須轉到生根培養基上進(jìn)行生根培養。

1個(gè)月后即可獲得鍵壯根系。組培苗的煉苗移栽 試管苗從無(wú)菌到光、溫、濕穩定的環(huán)境進(jìn)入自然環(huán)境，必須進(jìn)行煉苗。

一般移植前，先將培養容器打開(kāi)，于室內自然光照下放3天，然后取出小苗，用自來(lái)水把根系上的營(yíng)養基沖洗干凈，再栽入已準備好的基質(zhì)中，基質(zhì)使用前最好消毒。移栽前要適當遮蔭，加強水分管理，保持較高的空氣濕度（相對濕度98%左右），但基質(zhì)不宜過(guò)濕，以防爛苗。

植物組織培養方法 1 MS培養基的配制包括以下步驟.培養基母液的配制和保存 MS培養基含有近30種營(yíng)養成分，為了避免每次配制培養基都要對這幾十種成分進(jìn)行稱(chēng)量，可將培養基中的各種成分，按原量的20倍或200倍分別稱(chēng)量，配成濃縮液，這種濃縮液叫做培養基母液.這樣每次使用時(shí)，取其總量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀釋?zhuān)瞥膳囵B液.現將制備培養基母液所需的各類(lèi)物質(zhì)的量列出，供配制時(shí)使用.大量元素（母液Ⅰ） mg/L NH4NO3 33 000 KNO3 38 000 CaCl2·2H2O 8 800 MgSO4·7H2O 7 400 KH2PO4 3 400 微量元素（母液Ⅱ） KI 166 H3BO3 1 240 MnSO4·4H2O 4 460 ZnSO4·7H2O 1 720 Na2MoO4·2H2O 50 CuSO4·5H2O 5 CoCl2·6H2O 5 鐵鹽（母液Ⅲ） FeSO4·7H2O 5 560 Na2-EDTA·2H2O 7 460 有機成分（母液Ⅳ） ⅣA 肌醇 20 000 ⅣB 煙酸 100 鹽酸吡哆醇（維生素B6） 100 鹽酸硫胺素（維生素B1） 100 甘氨酸 400 以上各種營(yíng)養成分的用量，除了母液Ⅰ為20倍濃縮液外，其余的均為200倍濃縮液.上述幾種母液都要。