測(cè)定rna濃度的方法(如何測(cè)量RNA濃度)
1.如何測(cè)量RNA濃度
1、超微量分光光度計(jì)測(cè)260nm吸收值計(jì)算。
可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)260 nm。
2、也可以用RNA膠（凝膠成像）檢測(cè)。例如：原核生物的核糖體所含的rRNA有5S、16S及23S三種。在膠上就有三條明顯大小不一的條帶。凝膠遷移分析?？梢杂脕?lái)研究RNA-蛋白相互作用?；驹硎牵航Y(jié)合了蛋白的RNA在凝膠中的遷移速率更慢，因而可以區(qū)分出結(jié)合蛋白與未結(jié)合蛋白的RNA條帶。
擴(kuò)展資料
1、RNA的功能是：
(1)具有肽酰轉(zhuǎn)移酶的活性。
(2)為tRNA提供結(jié)合位點(diǎn)。
(3)在蛋白質(zhì)合成起始時(shí)，參與同mRNA選擇性的結(jié)合，在肽鏈的延伸中與mRNA結(jié)合。
2、原核生物的rRNA分三類(lèi)：5SrRNA、16SrRNA和23SrRNA。
真核生物的rRNA分四類(lèi)：5SrRNA、5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA。
S為大分子物質(zhì)在超速離心沉降中的一個(gè)物理學(xué)單位，可間接反映分子量的大小。原核生物和真核生物的核糖體均由大、小兩種亞基組成。
3、凝膠成像對(duì)DNA或RNA膠 進(jìn)行切膠、拍照、觀(guān)察、分析的實(shí)驗(yàn)室類(lèi)儀器，凝膠成像系統(tǒng)可以應(yīng)用于分子量計(jì)算、密度掃描、密度定量、PCR定量等生物工程常規(guī)研究。
參考資料來(lái)源：百度百科—核糖體RNA
參考資料來(lái)源：百度百科—超微量分光光度計(jì)
參考資料來(lái)源：百度百科—凝膠成像
參考資料來(lái)源：百度百科—RNA GEL SHIFT
2.如何測(cè)量RNA的純度和含量
1. 相關(guān)概念
RNA質(zhì)檢參數(shù)OD260/OD280、OD260/OD230的意義。
260、280、320、230nm下的吸光度分別代表了核酸、蛋白質(zhì)、鹽濃度和有機(jī)溶劑的值。
A230： 測(cè)定其它碳源物質(zhì)，如酚，糖類(lèi)等。
A260：核酸的吸收峰測(cè)，測(cè)RNA,DNA，引物等的濃度用的。
A280：蛋白質(zhì)的吸收峰。
一般的，我們只看OD260/OD280(Ratio,R)在1.8~2.1范圍內(nèi)時(shí)，我們認(rèn)為 RNA中蛋白的污染是可以容忍的，不過(guò)要注意，當(dāng)用 Tris 作為緩沖液檢測(cè)吸光度時(shí)，R 值可能會(huì)大于 2（一般應(yīng)該是<2.2的）。當(dāng)R < 1.8時(shí)，溶液中蛋白的污染比較明顯，可以根據(jù)自己的需要決定這份RNA 的命運(yùn)。當(dāng)R > 2.2時(shí)，說(shuō)明RNA已經(jīng)水解成單核酸了。純RNA的OD260/OD280的比值為2.0。
2. RNA質(zhì)量檢驗(yàn)
RNA樣品的品質(zhì)檢測(cè)一般分為總量，純度與完整性三大項(xiàng)。
總量：微量分光光度計(jì)測(cè)260nm吸收值計(jì)算。
純度：微量分光光度計(jì)測(cè)260nm/230nm吸收值的比值，用于評(píng)估有機(jī)溶劑殘留；260nm/280nm吸收值的比值，用于評(píng)估蛋白質(zhì)污染比例。
完整性：以Agilent Bioanalyzer進(jìn)行毛細(xì)管電泳（capillary electrophoresis），并以軟件的RIN(RNA Integrity Number)分?jǐn)?shù)評(píng)估，10為RNA完整性最好，0為最差。
l RNA純度
RNA在純化過(guò)程中容易受到DNA、蛋白質(zhì)及有機(jī)溶劑的影響，這些殘存物將會(huì)影響以后的操作。光譜分析（NANODROP）利用物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收度的不同，可以鑒別出溶液純度及濃度。RNA溶液的A260/A280的比值是一種RNA純度檢測(cè)方法，比值范圍一般為1.8-2.1。各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)對(duì)RNA純度要求不一，比如即使比值超出這個(gè)范圍，RNA樣品也一樣可以用于一些普通實(shí)驗(yàn)中，如Northern雜交、RT-PCR、熒光定量PCR和RNA酶保護(hù)等實(shí)驗(yàn)。
3.酵母rna含量測(cè)定的方法有幾種
酵母rna含量測(cè)定的方法有幾種
(1) 取潔凈的血球計(jì)數(shù)板一塊，在計(jì)數(shù)室上蓋上一塊蓋玻片。
(2) 將酵母菌液搖勻，用滴管吸取少許，從計(jì)數(shù)板中間平臺(tái)兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴（不宜過(guò)多），使菌液沿兩玻片間自行滲入計(jì)數(shù)室，勿使產(chǎn)生氣泡，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌液。也可以將菌液直接滴加在計(jì)數(shù)室上，然后加蓋蓋玻片（勿使產(chǎn)生氣泡）。
(3) 靜置約5分鐘，先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)室后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀(guān)察計(jì)數(shù)。
(4) 計(jì)數(shù)時(shí)用16中格的計(jì)數(shù)板，要按對(duì)角線(xiàn)方位，取左上、左下、右上、右下的4個(gè)中格（即100小格）的酵母菌數(shù)。如果是25中格計(jì)數(shù)板。除數(shù)上述四格外，還需數(shù)中央1中格的酵母菌數(shù)（即80小格）。由于菌體在計(jì)數(shù)室中處于不同的空間位置，要在不同的焦距下才能看到，因而觀(guān)察時(shí)必須不斷調(diào)節(jié)微調(diào)螺旋，方能數(shù)到全部菌體，防止遺漏。如菌體位于中格的雙線(xiàn)上，計(jì)數(shù)時(shí)則數(shù)上線(xiàn)不數(shù)下線(xiàn)，數(shù)左線(xiàn)不數(shù)右線(xiàn)，以減少誤差。
(5) 凡酵母菌的芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時(shí)，即可作為兩個(gè)菌體計(jì)算。每個(gè)樣品重復(fù)分?jǐn)?shù)2-3次（每次數(shù)值不應(yīng)招差過(guò)大，否則應(yīng)重新操作），取其平均值，按下述公式計(jì)算出每毫升菌液所含酵母菌細(xì)胞數(shù)。 每毫升菌液含菌數(shù)=每小格酵母細(xì)胞數(shù)*4000*1000*稀釋倍數(shù) 。
(6) 血球計(jì)數(shù)板用后，在水龍頭上用水柱沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或吹風(fēng)機(jī)吹干。
4.如何確定RNA質(zhì)量
檢測(cè)RNA溶液的吸光度
280、320、230、260nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）、鹽濃度和蛋白等有機(jī)物的值。一般的，我們只看OD260/OD280(Ratio,R)。1.82.0時(shí)，我們認(rèn)為RNA中蛋白或者時(shí)其他有機(jī)物的污染是可以容忍的，不過(guò)要注意，當(dāng)你用Tris作為緩沖液檢測(cè)吸光度時(shí)，R值可能會(huì)大于2（一般應(yīng)該是〈2.2的）。當(dāng)R〈1.8時(shí)，溶液中蛋白或者時(shí)其他有機(jī)物的污染比較明顯，你可以根據(jù)自己的需要決定這份RNA的命運(yùn)。當(dāng)R〉2.2時(shí)，說(shuō)明RNA已經(jīng)水解成單核酸了。
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