細胞室使用(細胞療法標本采集注意事項)

1.細胞療法標本采集注意事項有哪些?

(1) 采集標本前，先認真核對，準備好專(zhuān)用的無(wú)菌容器和酒精燈等；檢查容器有無(wú)裂縫、瓶塞有無(wú)松動(dòng)、培養基是否足夠、培養液有無(wú)渾濁和變質(zhì)等；填寫(xiě)瓶簽，在無(wú)菌容器外面貼上瓶簽，標明科室、床號、姓名、性別、住院號或ID號、治療目的 （細胞類(lèi)別）、抽血量、送檢日期和時(shí)間等。

（2） 采集標本前、中、后及制備操作前均應仔細“三查八對”，逐項核查，以免發(fā)生差錯，并向患者說(shuō)明抽血的相關(guān)注意事項及回輸的時(shí)間，以消除顧慮，取得患者及其家屬配合。 （3） 采集的標本，均須及時(shí)放入無(wú)菌容器內，禁止左右、上下?lián)u動(dòng)和振動(dòng)，只需用雙手心輕輕揉搓即可；采集標本時(shí)應嚴格執行無(wú)菌操作，不可混入防腐劑、消毒劑及其他藥物，以免影響細胞制備的結果；封蓋前用酒精燈常規滅菌瓶蓋和瓶口加蓋固封。

對疑有菌血癥、敗血癥等的患者，不應作為細胞供體。 （4） 釆集各種標本均應按照操作規程進(jìn)行，做到及時(shí)采集， 標本新鮮，量準確，注意及時(shí)送往細胞培養室，不應放置過(guò)久， 以免影響細胞制備的效能，特殊標本要有特殊注明。

2.分子生物學(xué)體外細胞培養具體操作過(guò)程和注意事項

一、準備工作 準備工作對開(kāi)展細胞培養異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，推備工作中某一環(huán)節的疏忽可導致實(shí)驗失敗或無(wú)法進(jìn)行。準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無(wú)菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。

二、取材 在無(wú)菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞（視實(shí)驗目的而定），經(jīng)過(guò)一定的處理（如消化分散細胞、分離等）后接入培養器血中，這一過(guò)程稱(chēng)為取材。如是細胞株的擴大培養則無(wú)取材這一過(guò)程。機體取出的組織細胞的首次培養稱(chēng)為原代培養。

理論上講各種動(dòng)物和人體內的所有組織都可以用于培養，實(shí)際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個(gè)體的組織容易培養，分化程度低的組織比分化高的容易培養，腫瘤組織比正常組織容易培養。取材后應立即處理，盡快培養，因故不能馬上培養時(shí)，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養液中保存。取組織時(shí)應嚴格保持無(wú)菌，同時(shí)也要避免接觸其他的有害物質(zhì)。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時(shí)容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。

三、培養 將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過(guò)程稱(chēng)為培養。如系組織塊培養，則直接將組織塊接入培養器皿底部，幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部，再加入培養基。如系細胞培養，一般應在接入培養器皿之前進(jìn)行細胞計數，按要求以一定的量（以每毫升細胞數表示）接入培養器皿并直接加入培養基。細胞進(jìn)入培養器皿后，立即放入培養箱中，使細胞盡早進(jìn)入生長(cháng)狀態(tài)。

正在培養中的細胞應每隔一定時(shí)間觀(guān)察一次，觀(guān)察的內容包括細胞是否生長(cháng)良好，形態(tài)是否正常，有無(wú)污染，培養基的PH是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示），此外對培養溫度和CO2濃度也要定時(shí)檢查。

原代培養一般有一段潛伏期（數小時(shí)到數十天不等），在潛伏期細胞一般不分裂，但可貼壁和游走。過(guò)了潛伏期后細胞進(jìn)入旺盛的分裂生長(cháng)期。細胞長(cháng)滿(mǎn)瓶底后要進(jìn)行傳代培養，將一瓶中的細胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續培養。每傳代一次稱(chēng)為“一代”。二倍體細胞一般只能傳幾十代，而轉化細胞系或細胞株則可無(wú)限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質(zhì)，也可能僅有不死性（Immortality）而無(wú)惡性。

四、凍存及復蘇 為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養基，以一定的冷卻速度凍存，最終保存于液氮中。在極低的溫度下，細胞保存的時(shí)間幾乎是無(wú)限的。復蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內迅速融解。然后將細胞轉入培養器皿中進(jìn)行培養。

凍存過(guò)程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復蘇時(shí)溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。

五、常用儀器設備 無(wú)菌室，超凈工作臺，三重純水蒸餾器，抽氣泵，壓力蒸氣消毒器，電熱恒溫培養箱，培養器具，CO2培養箱，恒溫水浴鍋，倒置顯微鏡，離心機，無(wú)菌過(guò)濾器，洗刷裝置，細胞計數板和電子細胞技術(shù)儀等等。

3.觀(guān)察植物細胞時(shí)顯微鏡使用注意事項

1.右手握住鏡臂，左手托住鏡座。

2.把顯微鏡放在實(shí)驗臺上，略偏左（顯微鏡放在距實(shí)驗臺邊緣7厘米左右處）。安裝好目鏡和物鏡。

二、對光 3.轉動(dòng)轉換器，使低倍物鏡對準通光孔（物鏡的前端與載物臺要保持2厘 米的距離）。 4.把一個(gè)較大的光圈對準通光孔。

左眼注視目鏡內（右眼睜開(kāi)，同時(shí)畫(huà)圖）。轉動(dòng)反光鏡，使光線(xiàn)通過(guò)通光孔反射到鏡筒內。

通過(guò)目鏡，可以看到白亮的視野。 三、觀(guān)察 5.把所要觀(guān)察的玻片標本（也可以用印有“6”字的薄紙片制成）放在載物臺上，用壓片夾壓住，標本要正對通光孔的中心。

6.轉動(dòng)粗準焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標本為止（眼睛看著(zhù)物鏡，以免物鏡碰到玻片標本）。 7.左眼向目鏡內看，同時(shí)反方向轉動(dòng)粗準焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直到看清物像為止。

再略微轉動(dòng)細準焦螺旋，使看到的物像更加清晰。 注意事項：實(shí)驗完畢，把顯微鏡的外表擦拭干凈。

轉動(dòng)轉換器，把兩個(gè)物鏡偏到兩旁，并將鏡筒緩緩下降到最低處。最后把顯微鏡放進(jìn)鏡箱里，送回原處。

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