常見的dna與rna提取方法(DNA實(shí)驗(yàn)室常用的DNA提取方法)
1.DNA實(shí)驗(yàn)室常用的DNA提取方法有哪些
提取DNA主要有SDS和CTAB法，其實(shí)提取效果的好壞主要看提取的對(duì)象是什么樣的材料，在提取之前一定要好好分析材料的特性，然后在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步驟。
一）CTAB法
CTAB是一種去污劑，可溶解細(xì)胞膜，它能與核酸形成復(fù)合物，在高鹽溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，當(dāng)降低溶液鹽濃度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）時(shí)，從溶液中沉淀，通過離心就可將CTAB與核酸的復(fù)合物同蛋白質(zhì)、多糖類物質(zhì)分開，然后將CTAB與核酸的復(fù)合物沉淀溶解于高鹽溶液，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇。
（二）SDS法
利用高濃度的SDS，在較高溫度（55—65℃）條件下裂解細(xì)胞，使染色體離析，蛋白質(zhì)變性，釋放出核酸，然后采用提高鹽濃度及降低溫度的做法使蛋白質(zhì)及多糖雜質(zhì)沉淀（最常用的是加入5M的KAc于冰上保溫，在低溫條件下KAc與蛋白質(zhì)及多糖結(jié)合成不溶物），離心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反復(fù)抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
以下是在提取熱帶水果DNA時(shí)設(shè)計(jì)的兩種不同方法步驟，對(duì)比起來CTAB法好，在禾本科植物效果差不多！
1、CTAB法
1） 在所需量的CTAB抽提液中加入2-巰基乙醇，使終濃度達(dá)2%(v/v)。將此溶液預(yù)熱至65℃。
對(duì)于每克新鮮的葉組織大約需要4ml的2-ME/CTAB抽提液。
2） 用液氮（-196℃）或干冰（-78℃）冷卻粉碎器/勻漿器，將0.5 g植物組織粉碎成細(xì)粉，然后將組織轉(zhuǎn)移到2.0 ml離心管。
3） 加入800 μl預(yù)熱的2-Me/CTAB，混合使之充分濕潤，于65℃溫育20 min，不時(shí)顛倒混勻。
4） 待冷至室溫后，加入800 μl氯仿/異戊醇（24:1），顛倒混勻至溶液呈乳濁狀----但不要振蕩。25℃，10000 rpm離心10 min。
5） 上清（~700 μl）轉(zhuǎn)移至另一干凈的離心管中，加入5 μl RNaseA貯液，37℃溫育30 min。
6） 加入700 μl氯仿/異戊醇，顛倒混勻，25℃，10000 rpm離心10 min。
7） 上清（~600 μl）轉(zhuǎn)移至另一干凈的1.5 ml離心管中，加入600 μl異丙醇，顛倒混勻，室溫或-20℃放置20 min。
8) 25℃，12000 rpm，離心10 min，收集沉淀。
9） 去上清，加1 ml70%乙醇洗滌沉淀兩次。（25℃，12000 rpm，離心10 min）
10）涼干DNA，溶于50 μl ddH2O,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
2、SDS法
① 將0.3 g植物材料于液氮速凍，然后在研缽中將其磨碎，將粉末轉(zhuǎn)至2 ml離心管中。
② 加入1.2 ml預(yù)熱至65℃的提取緩沖液（其中加入3 μl β—巰基乙醇，增加DNA的穩(wěn)定性），置65℃水浴中放置30分鐘，不時(shí)顛倒混勻。
③ 加入0.45 ml 5M的醋酸鉀，混勻，冰浴20分鐘，在10000 rpm離心20 min。需要的話，Miracloth紗布過濾除去沉淀，上清液轉(zhuǎn)入另一離心管中。
④ 加入等體積氯仿：異戊醇（24:1），輕輕顛倒混勻，12000 rpm離心15 min。
⑤ 轉(zhuǎn)移上清液到另一新離心管中，加5 μl RNaseA貯液，37℃溫育30 min。
⑥ 加入等體積氯仿：異戊醇（24:1），輕輕顛倒混勻，12000 rpm離心15 min。
⑦ 轉(zhuǎn)移上清液到另一新離心管中，加入0.7V異丙醇，輕輕顛倒混勻，-20℃放置30分鐘沉淀核酸。
⑧ 25℃，12000 rpm，離心10 min，收集沉淀。
⑨ 棄上清，70%乙醇洗兩次。
⑩ 涼干DNA，溶于50 μl ddH2O,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
2.分離DNA和RNA的方法有哪些
鹽析法 DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同 利用這一特點(diǎn) 選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使DNA充分溶解 而使雜質(zhì)沉淀 或者相反 以達(dá)到分離目的 DNA在NaCl溶液中的溶解度先增大后減小 在DNA溶解度最低時(shí) DNA從溶液中析出 而其他雜質(zhì)還留在溶液中 達(dá)到粗提取的目的
酶水解法 采用RNase（可以買）水解雜質(zhì)RNA如果混入DNase酶可以采用100度加熱15min使其失活 RNase不會(huì)失活 反之采用DNase可以提取RNA 混了RNase、時(shí)加入蛋白酶K或加碘乙酸鈉
3.RNA的提取方法有哪些
通過變性劑破碎細(xì)胞或者組織，然后經(jīng)過氯仿等有機(jī)溶劑抽提RNA，再經(jīng)過沉淀，洗滌，晾干，最后溶解。
但是由于RNA酶無處不在，隨時(shí)可能將RNA降解，所以實(shí)驗(yàn)中有很多地方需要注意，稍有疏忽就會(huì)前功盡棄。 0 T3 z( F& _, D6 c% ^" h6 Y A6 _RNA提取的一般步驟 - O: Y+ x$ p# s8 U4 M9 S 所有RNA的提取過程中都有五個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)，即：樣品細(xì)胞或組織的有效破碎；有效地使核蛋白復(fù)合體變性；對(duì)內(nèi)源RNA酶的有效抑制；有效地將RNA從DNA和蛋白混合物中分離；對(duì)于多糖含量高的樣品還牽涉到多糖雜質(zhì)的有效除去。
但其中最關(guān)鍵的是抑制RNA酶活性。RNA的提取目前階段主要可采用兩種途徑：提取總核酸，再用氯化鋰將RNA沉淀出來；直接在酸性條件下抽提，酸性下DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)入有機(jī)相而RNA留在水相。
第一種提取方法將導(dǎo)致小分子量RNA的丟失，目前該方法的使用頻率已很低。（ O( g; ^+ K) f+ i& ]% P 實(shí)驗(yàn)步驟： * l& d6 s5 e( q1 F( g2 | j, ^0 s 破碎組織→分離RNA→沉淀RNA→洗滌RNA→融解RNA→保存RNA。
6 D8 }. Q; Y, g* X 1、破碎組織和滅活RNA酶可以同步進(jìn)行，可以用鹽酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等破碎組織，加入β-ME可以抑制RNA酶活性。 " s% f, `0 [1 d* m! ]0 e2、分離RNA一般用酚、氯仿等有機(jī)溶劑，加入少量異戊醇，經(jīng)過此步，離心，RNA一般分布于上層，與蛋白層分開。
& X. P) i) Y; L# u/ [3、沉淀RNA一般用乙醇、3M NaAc(pH-5.2)或異丙醇。2 @0 d& z7 ?+ i, g1 @ 4、洗滌RNA使用70%乙醇洗滌，有時(shí)，為避免RNA被洗掉，此步可以省掉，洗滌之后可以晾干或者烤干乙醇，但是不能過于干燥，否則不易溶解。
3 @% V" o9 v+ I1 J2 o9 k" z5、融解RNA一般使用TE。 ; L5 f. n6 }( S1 t% Z& J6、保存RNA應(yīng)該盡量低溫。
為了防止痕量RNase的污染，從富含RNase的樣品（如胰臟、肝臟）中分離到的RNA需要貯存在甲醛中以保存高質(zhì)量的RNA，對(duì)于長期貯存更是如此。從大鼠肝臟中提取的RNA，在水中貯存一個(gè)星期就基本降解了，而從大鼠脾臟中提取的RNA，在水中保存3年仍保持穩(wěn)定。
另外，長度大于4kb的轉(zhuǎn)錄本對(duì)于痕量RNase的降解比小轉(zhuǎn)錄本更敏感。為了增加貯存RNA樣品的穩(wěn)定性，可以將RNA溶解在去離子的甲酰胺中，存于-70℃。
用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的雜物。來源于胰臟的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。
當(dāng)準(zhǔn)備使用RNA時(shí)，可以使用下列方法沉淀RNA：加入NaAc至0.3M,12,000*g離心5分鐘。 & P3 [7 m* ^$ U$ _" ? : F" x u* N( ?( I氯化鋰法提取總RNA: " u; }' I! r' ^' ^& l 本方法用高濃度尿素變性蛋白并抑制RNA酶，用氯化鋰選擇沉淀RNA，其特別適合于從大量樣品中提取少量組織RNA，具有快速簡潔的長處，但也存在少量DNA的污染及RNA得率不高，小RNA片斷丟失的缺陷。
# ~* S: }9 `* r4 Z3 P 試驗(yàn)試劑： " d$ r6 Q+ _. I8 Q1、氯化鋰/尿素溶液【氯化鋰126g(3M) 尿素、360g(6M) 加水至1L，過濾滅菌】 7 _8 w1 t" o9 a' q! i4 Z2、懸浮液【10mM? Tris-HCL (pH7.6) ,1mM? EDTA (pH8,0) ,0.5%SDS】 ！ m8 Q4 R, ]& y: b# `7 d試驗(yàn)步驟：7 [6 ?$ `* }; o7 _ Z' { 1、對(duì)于大量組織或細(xì)胞，則每克組織或細(xì)胞加入5-10ml氯化鋰-尿素溶液，勻槳器高速勻槳2分鐘；對(duì)于少量細(xì)胞（107個(gè)細(xì)胞/ml），則每克組織或細(xì)胞加入0.5ml氯化鋰-尿素溶液手工勻槳，并轉(zhuǎn)移至Eppendof管中。& Y) b: E, Q" l/ ^ Q: \$ s 2、勻槳液在0-4℃放置4小時(shí)后，12000g離心30分鐘。
x- C6 D- N/ N0 K! t2 a 3、取沉淀，加入原勻槳液1/2體積的氯化鋰-尿素溶液，重復(fù)步驟2。 ) y- x) S0 K9 y6 j, e4、沉淀用原勻槳液1/2體積的氯化鋰-尿素溶液復(fù)溶后，加入等體積酚/氯仿/異戊醇在室溫放置15-30分鐘并不時(shí)搖動(dòng)混勻，4000g離心5分鐘。
3 d2 v' i1 ~( ~* D5、取上層水相，加1/10倍體積的3M乙酸鈉（pH5.2）及2倍體積的乙醇，-20℃放置1小時(shí)，5000g離心。 L4 a' Q4 u" l: a* K% Z$ ?( e6、70%乙醇洗沉淀一次。
真空干燥。3 }; r0 [/ Q' G9 q 7、RNA溶解液溶解沉淀，得RNA，分裝，于-70℃保存。
0 f. X% R( H% B7 g ! y7 j5 u$ C' |) [% ~! J3 D: Q蛋白酶-熱酚法6 |" ^0 b* [) P3 S* c4 b4 H4 l 本方法適合于病毒RNA的提取 * I( i+ b# r! K試驗(yàn)試劑： $ ？4 [7 H9 `) J1、蛋白酶K（終濃度50ug/ml）, J5 p l6 V/ t7 [/ I 2、2*緩沖液：1%SDS? 20mMTris-HCL (pH 7.6)? 0.2MnaCL9 h, p ] y+ \$ Z) O 試驗(yàn)步驟：# W3 v8 G1 [$ ]5 y 1、提純病毒液中加入等體積緩沖液、蛋白酶K,37℃40-50分鐘。 - K0 p/ E' G0 M# Q- z7 n, {# d2、加入等體積65℃預(yù)熱的酚溶液，輕徭，在65℃保溫5分鐘后再輕徭。
w! `; W( ~, E: i3 ^3、離心，取上清，氯仿抽提一次。， |（ Z0 d; j2 @7 m+ d2 Q& x H 4、取上層水相，加1/10倍體積的3M乙酸鈉（pH5.2）及2倍體積的乙醇，-20℃放置1小時(shí)，5000g離心（10000g,10min）。
7 [/ w, h2 d6 U$ k5、70%乙醇洗沉淀一次。真空干燥。
% A5 Y; {( w% ]3 a* y, O e) P6、RNA溶解液溶解沉淀，得RNA，分裝，于-70℃保存。植物RNA提取過程中難點(diǎn)的相應(yīng)對(duì)策 植物RNA提取過程中難點(diǎn)的相應(yīng)對(duì)策 ） o5 B7 d/ Q3 _酚類化合物的干擾及對(duì)策： 。
4.分離DNA和RNA主要方法有哪些
鹽析法 DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同 利用這一特點(diǎn) 選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使DNA充分溶解 而使雜質(zhì)沉淀 或者相反 以達(dá)到分離目的 DNA在NaCl溶液中的溶解度先增大后減小 在DNA溶解度最低時(shí) DNA從溶液中析出 而其他雜質(zhì)還留在溶液中 達(dá)到粗提取的目的酶水解法 采用RNase（可以買）水解雜質(zhì)RNA如果混入DNase酶可以采用100度加熱15min使其失活 RNase不會(huì)失活 反之采用DNase可以提取RNA 混了RNase、時(shí)加入蛋白酶K或加碘乙酸鈉。
5.提取DNA的方法有哪些
DNA提取的幾種方法
(1).濃鹽法
利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提，得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩，使乳化，再離心除去蛋白質(zhì)，此時(shí)蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中，用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來.
也可用0.15 MNaCL液反復(fù)洗滌細(xì)胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白，再按氯仿---異醇法除去蛋白.
兩種方法比較，后種方法使核酸降解可能少一些.
以稀鹽酸溶液提取DNA 時(shí)，加入適量去污劑，如SDS可有助于蛋白質(zhì)與DNA 的分離.在提取過程中為抑制組織中的DNase對(duì)DNA 的降解作用，在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉，并稱SSC溶液，提取DNA.
(2).陰離子去污劑法：
用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質(zhì)變性，可以直接從生物材料中提取DNA .由于細(xì)胞中DNA與蛋白質(zhì)之間常借靜電引力或配位鍵結(jié)合，因?yàn)殛庪x子去污劑能夠破壞這種價(jià)鍵，所以常用陰離子去污劑提取DNA.
(3).苯酚抽提法：
苯酚作為蛋白變性劑，同時(shí)抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時(shí)，由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相.離心分層后取出水層，多次重復(fù)操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質(zhì)，用乙醇沉淀DNA .此時(shí)DNA是十分粘稠的物質(zhì)，可用玻璃漫漫繞成一團(tuán)，取出.此法的特點(diǎn)是使提取的DNA保持天然狀態(tài) .
( 4).水抽提法：
利用核酸溶解于水的性質(zhì)，將組織細(xì)胞破碎后，用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調(diào)節(jié)至2.6M.加入2倍體積95%乙醇，立即用攪拌法攪出.然后分別用66% 80%和95%乙醇以及丙銅洗滌，最后在空氣中干燥，既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質(zhì)含量較高，故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良，在提取過程中加入SDS.
6.分離DNA和RNA主要方法有哪些
[思路分析]：①取雞血細(xì)胞液（其紅細(xì)胞橢圓具核，除駱駝外，豬、羊、狗等哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞無核），或取新鮮豬肝、菜花、洋蔥等材料.雖然在細(xì)菌的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中提取的是無核細(xì)胞中的DNA，但一般而言，均是從具核的生物材料中提取DNA.當(dāng)然，在提取出的DNA中也含有一定量的胞質(zhì)DNA，即線粒體DNA和葉綠體DNA.值得推介的材料是洋蔥，取材容易，操作簡便，效果明顯.將家用加鹽洗潔精與洋蔥碎屑混合研磨并過濾后，再加酒精，微搖后即出現(xiàn)白色的毛絮狀DNA混合物.②使紅細(xì)胞溶血破膜以及化學(xué)藥劑十二烷基磺酸鈉 SDS（洗潔精的主要成分）或三氯乙酸溶膜.在低滲溶液中，如加蒸餾水使血細(xì)胞過度滲透吸水直至破裂，同時(shí)用玻棒加速血細(xì)胞及核破裂，經(jīng)一級(jí)過濾后濾出液為DNA核蛋白和RNA核蛋白.對(duì)于菜花、洋蔥等植物材料，在研磨破壞其細(xì)胞壁的同時(shí)，可考慮適量加入乙二胺四乙酸EDTA以防止DNA酶解.③利用DNA和RNA溶解度的不同析出DNA.在濃氯化鈉溶液（2 mol/L）中，DNA核蛋白的溶解度很大，而RNA核蛋白的溶解度很小.在稀氯化鈉溶液（0.14mol/L）中DNA的溶解度最低，蛋白質(zhì)的溶解度很高而出現(xiàn)鹽溶現(xiàn)象，經(jīng)二級(jí)過濾后濾出液主要為DNA粗制品.④DNA不溶于酒精，經(jīng)三級(jí)過濾后，再利用乙醇沉淀法使其他物質(zhì)溶于酒精而進(jìn)一步純化DNA.⑤二苯胺或甲基綠鑒定法即DNA遇二苯胺（沸水?。┍蝗境伤{(lán)色，遇甲基綠被染成藍(lán)綠色，且顏色的深淺與DNA純化程度有關(guān).在此過程中設(shè)計(jì)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，以增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)中二苯胺對(duì)DNA專一性顯色結(jié)果的可信度.分離DNA和RNA主要方法有哪些。
7.DNA的提取方法有多少種
DNA的提取方法有7種：酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒纏繞法、異丙醇bai沉淀法、表面活性劑快速制備法、加熱法快速制du備、堿變性快速制備。
DNA的提取原則
1、保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性；
2、核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過高濃度的金屬離子；
3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)zhi降低到最低程度；
4、其他核酸分子，如RNA，也應(yīng)盡量去除。
擴(kuò)展資料
提取daoDNA的注意事項(xiàng)
1、各操作內(nèi)步驟要輕柔，盡量減少DNA的人為降解。
2、注意防止非核酸類成分干擾。
3、要減少DNA的降解，促進(jìn)DNA與蛋白等的分相及DNA沉淀。
4、提取DNA過程中所用到的試劑和器材容要通過高壓烤干等辦法進(jìn)行無核酸酶化處理。
5、所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。
參考資料來源：百度百科-dna提取
